ADN Recombinante

 ADN Recombinante en la naturaleza:

La transferencia horizontal de genes (THG) es un mecanismo crucial en la evolución  genética de las bacterias, que permite el intercambio del mismo entre diferentes especies sin necesidad de reproducción sexual. Se produce principalmente a través de tres mecanismos: transformación, transducción y conjugación. De estos, la conjugación es el método más común y extendido, donde un donante bacteriano transfiere ADN a un receptor mediante contacto célula a célula, generalmente mediado por plásmidos.

Un ejemplo puede ser potencial de THG en bacterias aisladas de un pasivo ambiental contaminado con grasas en la mina de Cerrejón. Se identificaron cepas bacterianas con resistencia a varios antibióticos y se realizaron ensayos de conjugación in vitro y en microcosmos de suelo. Los resultados mostraron que las cepas seleccionadas podían transferir genes entre sí, lo que sugiere que la conjugación podría ser utilizada para mejorar procesos de biorremediación al facilitar la adaptación bacteriana a ambientes contaminados. Esto podría llevar a la creación de consorcios bacterianos más eficientes para la degradación de contaminantes orgánicos

Referencia: 

1.Rozo C, Dussán J. Análisis de transferencia horizontal de genes en ensayos de biorremediación con grasas recalcitrantes [Internet]. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0123-34752010000100003 

ADN recombinante artificial:

1.Tema: Clonación de cDNA del factor de crecimiento similar a la insulina-1 (IGF-1) bovino. 

2.Objetivo: Clonar gen de IGF-1 de Buffalo egipcio y expresar proteína en E. coli, facilitando producción a grandes escala de factor de crecimiento similar a la insulina 1. Ayudando a déficit hormonal y trastornos metabólicos, además de mejorar el desarrollo embrionario en el ganado.

3.Gen o secuencia a copiar: cDNA de IGF-1 (~543 bp). 

4.Enzima de restricción: No se especifica en el documento. 

5.Enzima ligasa: DNA ligase utilizada para la ligación del cDNA al vector. 

6. Vector: pTARGET™. Célula receptora: E. coli JM109 procariota.

7. Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Ligasión del cDNA al vector seguido de transformación en E. coli. 

8.Método de identificación de clones: Selección mediante cultivo en LB/ampicilina/X-Gal. Y RT-PCR para clonación de IGF-1 de ADNc de búfalos y trasformación a E. coli.

9.Métodos de identificación de la proteína recombinante: Análisis por SDS-PAGE para verificar la expresión del IGF-1.

10. Proteína recombinante: IGF-1 bobino

11. Eficacia: para probar la eficacia de IGF-1 recombinante se realizo un análisis SDS-PAGE para verificar expresión de la proteína recombinante, revelando que esta expreso un tamaño esperado de 7.6kDa. Se verifico su actividad biológica proliferativa utilizando líneas celulares HeLa.

Referencias:

Aboul-Soud MAM. cDNA Cloning of a Bovine Insulin-like growth factor-1 from Egyptian Buffalos and Expression of its Recombinant Protein in Escherichia coli. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária E Zootecnia [Internet]. 1 de abril de 2020;72(2):523-34. Disponible en: https://www.scielo.br/j/abmvz/a/kQQwt5NQW5C6xq4VgKcrkPH/?lang=en